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分光光度计的原理及使用注意事项

发布日期:2017-07-11      浏览次数:822

分光光度计是实验室常规分析设备,主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。它利用光谱分析方法对样品进行定性、定量分析,在现代分子生物实验室中常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量等。分光光度计又称光谱仪(spectrometer),是采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。

核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率zui高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。

蛋白质的直接定量(UV法)
这种方法是在280nm波长直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。该方法适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。

比色法蛋白质定量
比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨
基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。

细菌细胞密度(OD 600)
OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线。需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态。

分光光度计属于精密仪器,应当妥善保管和精心维护,这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高。

分光光度计使用注意事项
1. 使用仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查。
2. 指针式仪器尚未接通电源时,电表指针必须位于零刻度上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调零。
3. 仪器在制造厂原包装条件下,应储存在环境温度为5℃~35℃,湿度不超过85%的室内,且在空气中不应有足以引起腐蚀的有害物质。
4. 仪器工作环境应在在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。
5. 比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
6. 比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。
7. 鉴于仪器在出厂之前已经调试到*状态,所以用户不能擅自调整,更不能擅自打开机壳拆卸其中的零件(更换光源灯除外),尤其是拆卸单色器、不能碰伤或擦拭光学原件镜面。
8. 如有故障急需自修,应在厂方技术人员同意指导下,请具有相应资质的专业人员进行检查、调整和维修,建议返修。

美谱达在光度计的方法学应用、产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发等方面不断开拓创新,相继推出UV/Vis-1系列紫外/可见分光光度计,UV-3系列扫描型紫外/可见分光光度计,UV-6系列双光束扫描型紫外/可见分光光度计,以满足各类实验室对分光光度计产品的不同需求,受到国内外用户的普遍好评。

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